2-8℃

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！

一年

WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等

细菌

1. 使用方便：不需昂贵设备。
2. 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3. 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4. 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
6. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
7. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
8. 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

1. 离心机
2. 振荡器
3. 涡旋混匀器
4. 超声细胞破碎仪
5. 移液器6. 冰箱

1. PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒

1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套

1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
5. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
6. 本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。

1. 裂解液的准备：
根据所需要提取的样本量，每500 ul裂解液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物和5ul蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。
2. 在4℃， 10000×g条件下将菌液离心5 min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每50-100 mg湿重菌体样本加入500 ul裂解液，吹打混匀，2-8℃振荡20-30分钟。
5. 在150 w-300 w，10 s超声/10 s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。

6. 在4℃， 12000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入冷的干净离心管。
7. 即得到细菌总蛋白样品。
8. 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。

1. 蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。部分革兰氏阳性菌可能较难裂解，最好进行超声处理。

2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3. 提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有DNA等的复合物。可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和核酸结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。

4. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

1. Daizong Cui et al.
The cytotoxicity of endogenous CdS and Cd2+ ions during CdS NPs biosynthesis
Journal of Hazardous Materials 2021 （IF=14.224）

2. HaiFeng Su et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=16.744）

3. Jing Qian et al.
Oxidative stress responses of pathogen bacteria in poultry to plasma-activated lactic acid solutions
Food Control 2020 （IF=6.652）

4. HF Su et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=8.035）

5. H Shi et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=24.319）